20世紀末，Vogelstein等提出數字PCR(digital PCR,dPCR)的概念,通過(guò)將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬(wàn)份,分配到不同的反應單元,每個(gè)單元至少包含一個(gè)拷貝的目標分子(DNA模板),在每個(gè)反應單元中分別對目標分子進(jìn)行PCR擴增,擴增結束后對各個(gè)反應單元的熒光信號進(jìn)行統計學(xué)分析。

數字PCR是一種核酸分子絕對定量技術(shù),主要采用當前分析化學(xué)熱門(mén)研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法。數字PCR一般包括兩部分內容,即PCR擴增和熒光定量分析。在PCR擴增階段,與傳統技術(shù)不同,dPCR一般需要將樣品稀釋到單分子水平,并平均分配到幾萬(wàn)個(gè)反應腔室里反應。這樣子相當于變相的對靶基因進(jìn)行富集。與此同時(shí),由于對原樣品的大幅度的稀釋,使得PCR抑制劑濃度顯著(zhù)降低,這樣dPCR對初始PCR反應物里抑制劑的要求顯著(zhù)低于qPCR(Quantitative Real-time PCR)。不同于qPCR對每個(gè)循環(huán)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光測定的方法,dPCR技術(shù)是在擴增結束后對每個(gè)反應單元的熒光信號進(jìn)行采集,有熒光信號的微滴判讀為1,沒(méi)有熒光信號的微滴判讀為0,最后根據泊松分布原理及陽(yáng)性微滴的個(gè)數與比例得出靶分子的起始拷貝數或濃度。

數字PCR基本原理

基于分液方式的不同,數字PCR主要分為3種：微流體數字PCR (Microfluidic digital PCR,mdPCR)、微滴數PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)、芯片數字PCR(Chip digital PCR,cdPCR),分別通過(guò)微流體通道、微液滴或微流體芯片實(shí)現分液,分隔開(kāi)的每個(gè)微小區域都可進(jìn)行單獨的PCR反應,其中mdPCR基于微流控技術(shù),對DNA模板進(jìn)行分液,微流控技術(shù)能實(shí)現樣品納升級或更小液滴的生成,但液滴需要特殊吸附方式再與PCR反應體系結合,mdPCR已逐漸被其他方式取代;ddPCR技術(shù),是相對成熟的數字PCR平臺,利用油包水微滴生成技術(shù)將含有核酸分子的反應體系生成20000個(gè)納升級微滴,經(jīng)PCR擴增后,微滴分析儀逐個(gè)對每個(gè)微滴進(jìn)行檢測;cdPCR利用微流控芯片技術(shù)將樣品的制備、反應、分離和檢測等集成到一塊芯片上。利用集成流體通路技術(shù)在硅片或石英玻璃上刻上許多微管和微腔體,通過(guò)不同的控制閥門(mén)控制溶液在其中的流動(dòng)來(lái)實(shí)現生物樣品的分液、混合、PCR擴增,實(shí)現絕對定量。

芯明天壓電陶瓷促動(dòng)器以其優(yōu)異的性能和方便的操作適用于各類(lèi)微操作、微控制應用。芯明天壓電陶瓷促動(dòng)器采用壓電震動(dòng)技術(shù),可產(chǎn)生高精度、高頻率且可控的微振動(dòng),非常適于PCR設備中的微流體控制或物質(zhì)的打散。

芯明天壓電陶瓷促動(dòng)器

芯明天壓電陶瓷促動(dòng)器具有非常多的種類(lèi),如小體積型、高頻型、大出力型、低溫真空型等等,具體的選擇取決于用戶(hù)設備的工作參數以及結構。

壓電陶瓷疊堆

芯明天具有上百種壓電陶瓷疊堆的型號,具有多樣化的尺寸及參數,產(chǎn)生的形變位移由1‰至2‰不等,且空載諧振頻率非常高,可達近500kHz。此外,壓電陶瓷疊堆的尺寸非常小巧,常見(jiàn)的截面尺寸有2×2mm、3.5×3.5mm、5×5mm、7×7mm、10×10mm等,并且如此小的截面,卻可達上千牛頓的出力。
壓電陶瓷疊堆一般通過(guò)膠粘接的方式來(lái)固定安裝。

壓電陶瓷促動(dòng)器

壓電陶瓷促動(dòng)器非常適用于作為振動(dòng)激勵源,工作頻率可達千赫茲。
芯明天壓電陶瓷促動(dòng)器與壓電陶瓷疊堆相比,外部具有金屬保護外殼,具有更高的可靠性,并且可承受一定的拉力。此外,抗扭力型壓電陶瓷促動(dòng)器具有一定的抗扭力功能,可防止安裝過(guò)程中扭力造成內部壓電陶瓷的損壞。

壓電陶瓷促動(dòng)器的移動(dòng)端具有多種安裝選擇,可選平頭、球頭、外螺紋、內螺紋或定制接口,安裝方式非常靈活,且很便捷。

壓電陶瓷促動(dòng)器的長(cháng)度越長(cháng),它的位移范圍將越大;直徑越大,出力也將越大。具有環(huán)形與柱形兩種外形。使用中,可采用正立、倒置或橫向安裝,但需要提供具體負載等參數,由我們的技術(shù)人員分析可行性及安全性。

壓電納米定位臺

芯明天壓電納米定位臺與壓電陶瓷促動(dòng)器相比,可進(jìn)行多方向(多維)的運動(dòng)控制,可在1至6維自由選擇運動(dòng)方向及行程范圍。

壓電納米定位臺一般采用機械放大結構,它的行程可長(cháng)達1mm,可定制設計外形結構?？蛇x擇中心通孔設計,更適于樣品的安裝。

壓電納米定位臺的帶載后工作頻率一般約在幾十赫茲。

壓電物鏡定位器

芯明天壓電物鏡定位器是專(zhuān)為驅動(dòng)物鏡頭而設計,可帶載物鏡進(jìn)行單軸的聚焦定位,精度可達2.5nm,非常適于高精度顯微成像等應用。

壓電物鏡定位器與物鏡之間通過(guò)適配器連接,可將物鏡快速鎖定在預期位置。多種螺紋牙可選,如M27×0.75、M26×0.75、M26×1/36"、M25×0.75、W0.8×1/36"等,也可定制,便于與顯微鏡集成安裝。

壓電偏擺臺

芯明天壓電偏擺臺是可進(jìn)行角度運動(dòng)的壓電平臺,一般為θx、θy二維偏轉,也可選擇θx、θy、θz及XYZ六軸運動(dòng),運動(dòng)調節更靈活。

壓電偏擺臺適用于顯微成像中的樣品調平,也適于成像中的光路徑調節。調節速度可達毫秒量級,偏轉精度可達納弧度。